Services de congélation

Le tissu devrait être congelé le plus rapidement possible après le prélèvement de l’animal afin de préserver la morphologie tissulaire. Le tissu peut être soit non fixé (frais), soit fixé avant la congélation.

Il existe différentes méthodes de congélation des tissus. La plateforme technologique congèle le tissu dans un récipient contenant un mélange d'isopentane refroidi dans de la glace sèche.

Le tissu est fixé soit dans du paraformaldéhyde à 4 % ou dans la formaline à 10 % aussitôt que possible après le prélèvement du tissu de l’animal. Le temps de fixation dépend de la taille de l’échantillon de tissu, mais dure habituellement entre 24 et 48 heures. Le tissu est rincé dans une solution salée-tampon phosphate (PBS) et ensuite transféré dans une solution de sucrose à 20 % ou 30 % dans la PBS. La solution de sucrose est ensuite remplacée trois fois (premier et deuxième changements après une heure, troisième changement après deux heures ou laisser durant la nuit). Les échantillons peuvent alors être amenés à la plateforme technologique.

Le sucrose agit en tant que cryoprotecteur et il est fortement recommandé de l’utiliser après la fixation pour préserver la morphologie tissulaire. Il prévient la formation de cristaux de glace dans les tissus lorsque l’eau se congèle et se dilate. Les cristaux de glace peuvent casser les membranes cellulaires et produire des trous à l’intérieur des cellules, créant ainsi des artéfacts appelés « fromage suisse ». D’autres cryoprotecteurs qui ont été utilisés comprennent le glycérol et le polyéthylène glycol.

Habituellement, un composé permettant d’obtenir la température de coupe optimale (O.C.T.) est utilisé pour inclure un tissu congelé. Ce procédé a lieu durant le processus de congélation, dans un moule cryogénique. L’O.C.T. peut également être ajouté au mandrin avant la coupe afin de servir de support au tissu.

Les sections congelées peuvent être préparées plus rapidement que celles qui sont incluses dans la paraffine et conviennent mieux aux analyses moléculaires (études d’ADN ou d’ARN, études d’enzymes et modifications post-translationnelles), étant donné que les protéines ne se dénaturent pas lorsqu’elles se trouvent dans la paraffine. Elles sont habituellement plus épaisses (8 um ou >), fournissent une résolution moindre que les coupes dans la paraffine et sont moins stables (doivent demeurer congelées). La plateforme technologique a des protocoles bien établis concernant la coloration de base ou spéciale et la coloration immunohistochimique ou IF (vérifier) sur des sections congelées.